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Tunel和Annexin V的区别及选择
1.细胞发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA，基因组DNA双链或单链断裂时会出现产生大量的粘性3'-OH末端，正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，3'-OH可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的催化作用下，与488/Cy-dUTP结合，从而通过荧光显微镜或流式细胞仪直接进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(Terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。
选择指南：Tunel法可以对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，可检测出极少量的凋亡细胞，可用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。选择性的检测凋亡细胞，而非坏死细胞或因辐照和药物治疗而造成的DNA链断裂的细胞。用流式细胞仪检测或涂片后在荧光显微镜下观察。
2.正常细胞中，磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡最早期，PS由翻向外侧，这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。Annexin V与ps有高度亲和力，因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶( Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料, 它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。但由于Annexin V本身没有荧光，因此需要偶联荧光基团，以便被流式细胞仪检测，通常会偶联FITC、eGFP、AF488、APC等基团。
选择原则：若细胞没有自发荧光，可以选择Annexin V-FITC/PI或Annexin V-eGFP/PI。这类试剂盒荧光光谱重叠较小，对实验人员的技术要求相对较低。
如果细胞本身需要检测绿色荧光，可以选择Annexin V-APC/PI或者Annexin V-APC/7AAD组合的试剂盒。但APC和PI的荧光光谱有较大重叠，对检测仪器和技术人员有较高要求，如果细胞本身需要检测红色荧光，则应确认红色荧光的激发光和发射光波长，如果与PI/7AAD的激发光和发射光均相似，则不能用这类试剂盒检测该细胞的凋亡。
3. JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可以产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体，可以产生绿色荧光。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的标志性事件。因此该试剂盒可以用于早期的细胞凋亡检测。
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